Director: Guillermo Alejandro Bavera, Méd. Vet., Profesor Titular
Efectivo de Producción Bovina de Carne, Depto. Producción Animal,
Facultad de Agronomía y Veterinaria,
Universidad Nacional de Río Cuarto, Río Cuarto, provincia de Córdoba, República
Argentina
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Dr. Leonardo De Luca. 2002. Director Técnico. Laboratorios
Burnet S.A.
1. Selección del embrión. Separar mórulas de blastocistos.
2.
Lavar 10 veces con una solución de Dulbecco modificado,
con 10% de suero fetal bovino.
3.
Mórulas: sumergir durante 10 minutos el embrión en una
solución de Dulbecco, con 1,5 molar de glicerol, más 0,1 molar de sucrosa.
Blastocistos: sumergir durante 10 minutos el embrión en una solución de
Dulbecco, con 1,5 molar de glicerol, más 0,2 molar de sucrosa.
4.
Tomar una pajuela de 0,25cc y cargar en ella el embrión
en el siguiente orden:
a)1ra. columna de Dulbecco con suero fetal al 10%.
b) 2da. columna, pequeña burbuja de aire.
c) 3ra. columna de Dulbecco con medio de congelación.
d) 4ta. columna, pequeña burbuja de aire.
e) 5ta. columna, cargar el embrión en su medio.
f) 6ta. columna, pequeña burbuja de aire.
g) completar el resto de la pajuela con medio de congelación.
5.
Llevar los embriones a la congeladora con una
temperatura de entre -6°C a -7°C, donde permanecerán 10 minutos en stand by.
6.
A su término tocar la pajuela a la altura de la 3ra.
columna con una pinza hemostática, previamente sumergida en nitrógeno líquido
para que alcance en su extremo los -196°C. Este método (Seeding) evitará la
muerte del embrión por sobrefusión.
7.
La corrida de temperatura será de 0,5°C por minuto
hasta alcanzar los -35°C, momento en que se introducirá la pajuela en nitrógeno
líquido (Plunging)
8.
DESCONGELAMIENTO: Previa revisión de las receptoras
para determinar si existe cuerpo lúteo apto, proceder en el siguiente orden:
a) tomar la pajuela con una pinza y exponerla a temperatura ambiente durante 1 segundo.
b)
sumergir la pajuela en agua a 35°C durante 1 minuto.
c)
Sacar la pajuela del agua y secarla prolijamente, SIN
AGITARLA.
d)
cortar el extremo con un cutter especial evitando
agitarla.
e)
cargar la pajuela en la pipeta de transferencia e
implantar el embrión sobre el cuerno en que se presenta el cuerpo lúteo.
SUGERENCIAS: El mejor resultado obtenido es el uso de las
pipetas de implante alemanas con punta descartable a rosca. Inyectar MPH
(progesterona 50mg/cc) 5cc por vía IM. Con el método descripto se ha logrado
una preñez no inferior al 60%.
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